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以常見的 4 個內徑(1.0、2.1、3.0、4.6 mm)和 4 個柱長(30、50、100、150 mm)組合(共 16 種規格)做了具體換算表;公式同樣適用于其它規格。 一、核心原則與公式 柱截面積 A = π d^2 / 4 (d 單位 mm,面積單位為 mm^2) 柱體積 V(μL) = A × L (mm^3) = π d^2 L /4 (1 mm^3 = 1 μL) 保持相同線速度 u:流速 F 與截面積成正比 F2 = F1 × (d2^2 / d1^2) 樣品質量(或最大裝樣量)按柱體積比例放縮(近似): M2 = M1 × (V2 / V1) = M1 × (d2^2 L2 / d1^2 L1) 注射體積按柱體積的一定百分比(避免色譜峰展寬): 推薦注射體積 ≈ 0.5%–2% 的柱體積(分析柱),半制備可更高 梯度時間與體積關系(保持相對保留):若要保持相同保留/分離,梯度時間 tG 可按柱體積比例縮放: tG2 = tG1 × (V2 / V1) 二、16 種規格的體積、建議流速與常用注射體積(基準:4.6×150 mm 對應流速 1.00 mL/min) (表中體積以 μL,注射體積給出 0.5% 與 1% 兩檔;流速為按 d^2 等比例換算的參考值) d = 4.6 mm(d^2=21.16) 150 mm:V=2493 μL,F=1.00 mL/min,inj 0.5%=12.5 μL;1%=24.9 μL 100 mm:V=1662 μL,F=1.00 mL/min,inj 8.3 /16.6 μL 50 mm:V=831 μL,F=1.00 mL/min,inj 4.2 /8.3 μL 30 mm:V=499 μL,F=1.00 mL/min,inj 2.5 /5.0 μL d = 3.0 mm(d^2=9.00,縮放因子 ≈0.426) 150 mm:V=1059 μL,F≈0.43 mL/min,inj 5.3 /10.6 μL 100 mm:V=706 μL,F≈0.43 mL/min,inj 3.5 /7.1 μL 50 mm:V=353 μL,F≈0.43 mL/min,inj 1.8 /3.5 μL 30 mm:V=212 μL,F≈0.43 mL/min,inj 1.1 /2.1 μL d = 2.1 mm(d^2=4.41,縮放因子 ≈0.208) 150 mm:V=520 μL,F≈0.21 mL/min,inj 2.6 /5.2 μL 100 mm:V=346 μL,F≈0.21 mL/min,inj 1.7 /3.5 μL 50 mm:V=173 μL,F≈0.21 mL/min,inj 0.9 /1.7 μL 30 mm:V=104 μL,F≈0.21 mL/min,inj 0.5 /1.0 μL d = 1.0 mm(d^2=1.00,縮放因子 ≈0.0473) 150 mm:V=118 μL,F≈0.047 mL/min(≈0.05),inj 0.6 /1.2 μL 100 mm:V=78.5 μL,F≈0.047 mL/min,inj 0.4 /0.8 μL 50 mm:V=39.3 μL,F≈0.047 mL/min,inj 0.2 /0.4 μL 30 mm:V=23.6 μL,F≈0.047 mL/min,inj 0.12 /0.24 μL (注:上述注射體積是按“柱體積百分比”法估算,實際可用注射量還受樣品溶劑、峰形、系統外體積等影響) 三、換算示例 將方法從 4.6×150(1.0 mL/min,注入 20 μL)換到 2.1×100: 流速:F2 =1.00 × (2.1^2 / 4.6^2) ≈1.00 × 0.208 = 0.208 mL/min ≈0.21 mL/min 注入體積按體積比例縮放:V(4.6×150)=2493 μL,V(2.1×100)=346 μL inj2 = 20 μL × (346 / 2493) ≈ 2.78 μL → 取 ~3 μL 若為梯度法,梯度時間也按體積比縮短:tG2 = tG1 × (346 / 2493) 樣品質量:若在 4.6×150 上載 200 μg,換到 3.0×150: M2 = 200 × (1059 / 2493) ≈ 85 μg 四、注意事項與限制 粒徑與色譜動力學:若替換柱的顆粒大小不同(如從 5 μm 到 1.7 μm),保持相同比例流速并不能完全保證相同柱效或峰形;需考慮壓差與傳質因素(保持相同線速度并調整溫度或流速以優化)。 體系外體積(extra-column volume):在窄內徑(2.1/1.0 mm)系統中,系統死體積會顯著影響峰形與分辨率,注入體積和連桿/接頭需最小化。 溶劑效應:樣品溶劑比流動相強時會產生提前淌峰或峰形變差,注入體積需更保守。 檢測靈敏度:縮小內徑或體積會降低絕對檢測限(信號減?。?,但峰高可能增加(更窄的峰),需調整濃度或檢測器設置。 壓力限制:縮小內徑或更小顆粒會顯著增加背壓,注意泵與柱的壓力上限。 裝樣量不是單純按體積放大:對于吸附型或分散性差的體系,最大裝樣量也取決于固定相表面積、分配系數和樣品復雜度,預實驗驗證必需。 五、實操建議 先按上述比例換算流速與注入體積,做小范圍方法優化(1–3 次驗證實驗)。 對等度梯度,按柱體積比縮放梯度時間并檢查保留因子與分辨率。 當換成窄徑柱(2.1 或 1.0 mm)時,減小注入體積并盡量用低死體積連接件,必要時使用分流或微量進樣器。 若目標是制備放大(prep),應按固相表面積(g 填料)而不是僅按體積放大,并考慮流速與線速度匹配。 |
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